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猪抗体检测篇一:猪抗原抗体检测方案
猪抗原抗体检测方案 .一、检测的目的1(疾病预警(1)了解疾病在场内的污染状况，制定相应策略(2)提前了解免疫抗体的高低及整齐度，及时纠正2(免疫程序的评估与优化(1)了解母源抗体的消长情况(2)疫苗接种的效果-----免疫抗体监控3(疾病控制和清除计划:通过系统检测和措施，实施疾病的控制或清除计划 4(疾病诊断二、重点进行监测三大猪病:猪瘟、蓝耳、伪狂犬1. 猪瘟主要问题(1) 抗体水平偏低(2) 疫苗的选择及剂量:细胞苗,脾淋苗,，150 RID = 37 PD50(3) 持续性感染猪的存在2. 猪瘟抗原检测(1) 常用方法:PCR、荧光抗体和ELISA(2) 检测目的:引进种猪或后备母猪时的检查，疑似病例的确诊，猪群带毒率的定期评估(3) 结果分析:猪瘟抗原ELISA阳性结果代表野毒阳性，PCR和荧光抗体阳性结果有可能是疫苗毒的干扰。3. 猪瘟抗体ELISA检测要点:A.怎样评估母源抗体和免疫效果 .1)当母源抗体的降到阻断率(Block)50%以下时，才能不干扰疫苗的免疫。(确定首免日龄)2)免疫后阻断率(Block)上升到50%以上才能代表免疫合格。良好的种猪场要求:阳性率100%(>40)，合格率90%(>50) cv1)持续性感染的种猪可间断性或持续性排出病毒，他们成为整个猪群的感染源。2)首次使用应对母猪群进行检测，对抗体低下猪只进行补针后6周复检。若仍然没有抗体产生，应进行淘汰。C. 猪瘟抗体检测结果分析1) Cutoff值是 >1:16代表抗体阳性2) 实际生产中至少要在1:64以上才有一定的保护，经产母猪多次疫苗免疫后抗体水平一般会在1:256到1:1024左右波动。D. 猪瘟抗体 ELISA检测时间表品项 种类 时间 目的 取样数量 日常评估 后备母猪 在配种前 野毒感染和抗体水平 全部经产母猪 3个月一次 评估母猪群的健康状态20和抵抗力商品猪 二免后4-6周 监控免疫效果 20 首免日龄 仔猪 21日龄 评估母源抗体衰减水平，15选择最佳首免时间 28日龄 1535日龄 1542日龄 154.蓝耳病的主要问题(1) 毒株的变异与交叉保护(2) 疫苗的选择:灭活疫苗、弱毒疫苗(3) 猪群稳定性评估5.蓝耳病的检测方法(1) 抗原:RT-PCR(2) 抗体:ELISA6.蓝耳病的抗体检测结果分析(1)对于稳定的种猪群，S/P值为0-2左右，很少大于2.5. (2)良好免疫群的典型的S/P比值范围为:0.7 to 1.8 ;有些可能>2.0 。(3)如果每年免疫两次，仍有多于20,的猪抗体为阴性，需要对疫苗的管理.和使用进行检查。(4) 当S/P >2.5 – 病毒血症(5) 当S/P >3.5-高于5.0 – 急性感染(6) 6-7周龄时，多数仔猪抗体可变为阴性(无病毒循环)(7) 引进种猪，要剔出阳性值SP>1.2的猪只，保证种群的稳定(8) 公猪抗体阳性值SP>2.5的最好不要使用(9) 母猪群间隔1-2个月对群体进行监控，了解猪群等稳定状态(10) 仔猪了解病毒的感染时间，加强药物保健(11) 当S/P >2.5时，猪群即呈现不稳定状态，需要采取措施进行控制7.蓝耳病抗体检测时间表品项 种类 时间 目的 取样数量 日常评估 后备母猪 在配种前 防止引入不稳定猪只 全部经产母猪 2个月一次 了解猪群稳定性 20商品猪 3个月一次 监控免疫效果和稳定性 20 8.伪狂犬的主要问题(1)种猪群野毒抗体(gE抗体)阳性率居高不下(2)中大猪的呼吸道问题(3)散发性母猪繁殖障碍(4)净化方案的选择9.伪狂犬的检测方法(1) PRVgB:总抗体，S/N值和阻断率(BLOCK值)(2) PRVgE(I):野毒抗体 .(3)通过PRV-gB和PRV-gI抗体检测可了解本场伪狂犬病的流行状况，制定相应的免疫方案及措施。10.伪狂犬清除计划(1) 在阳性率低的种猪群，建议一次性淘汰所有阳性种猪。每个季度筛选一次，加强疫苗免疫，同时保证引入阴性后备母猪和种公猪，一般一年见效。(2) 在阳性率很高的种猪群，保证引入阴性后备母猪和种公猪，加强免疫。每季度抽样监控野毒阳性比例防止感染扩大并用PRV-gB评估免疫抗体水平，三年可见效。11.伪狂犬检测时间表品项 种类 时间 目的 取样数量 日常评估 后备母猪 在配种前 野毒感染和抗体水平全部(gB和gE抗体)经产母猪 3个月一次 评估母猪群的健康状态20和抵抗力(gB和gE抗体)商品猪 免疫后4周 监控免疫效果(gB抗体) 20 首免日龄 仔猪 70-80日龄免评估母源抗体衰减水平，15疫前 选择最佳首免时间(gB抗体)
猪抗体检测篇二:猪病抗体检测的几个问题？
一、抽样多少才比较准确？ 一个检测的群体要抽取多少比例的样本进行检测才有代表性，其结果可信度高呢？ 现实中有不少猪场是根据群体百分率来取样，但这种做法不正确。正确做法应根据统计学可信度取样。 美国爱德仕公司区域经理马祥表示，要检测的数据可信度高，参考价值大，必须按照规定抽取一定的样品进行检测。爱德仕公司提供的建议是按照95%置信区间取样。每个检测群体大概需要30头。樊福好博士表示，大约每个群体抽取样品28-30头基本达到可信度95%，已经有足够代表性。 二、一般商品猪场需要对哪些疫病进行监测？什么时候检测抗原？什么时候检测抗体？ 专家建议，猪瘟、蓝耳病这两个当前养猪业的主要疫病大约需要一个季度检测一次，而伪狂犬则可以半年检测一次。种猪场的后备种猪并群时最好能做以上三种疫病抗体的检测，但如果抗体水平一直保持稳定，后备猪并群时可以考虑抽样检测。 猪发病一般不应该进行抗体检测，要检测抗原。抗体只是疫病的一种评估手段。 三、猪群进行抗体检测的费用是多少？ 据了解，当前几乎所有的猪病实验室的检测费报价都是一样的，猪瘟抗体检测费是30元/样，伪狂犬为20元/样，蓝耳病为50元/样，圆环病毒为40元/样。实际上，每个猪病实验室会根据客户的不同，检测的样品多少来给予不同程度的折扣。 据悉，一个存栏能繁母猪1000头的猪场，一年主要疫病（猪瘟、伪狂犬和蓝耳病）的监测费用大约为2-3万元。 四、多大的猪场建立猪病实验室比较合算？ 能繁母猪超过3000头的猪场可以考虑建立猪病实验室。而低于3000头的猪场，建立猪病实验室并不合算，猪病实验室不单纯用作疫苗抗体检测，还可以进行药物残留、药敏实验等试验。 五、一般猪病实验室的检测结果能否作为法律上的依据？ 除了国家规定的检测机构外，其他检测机构的检测结果并不能作为法律上的依据，仅能作为平时生产上的参考。 六、如何以实验室手段进行猪瘟“净化” 在国内当前疫病形势下，无法达到完全净化猪瘟，但可以通过实验室检测手段来清楚猪群带毒猪及通过实验室来检测猪群猪瘟免疫情况，可以达到“净化”猪瘟的效果。 当检测猪群猪瘟抗体阴性猪超过10%时，建议暂缓“净化”计划。因为当猪群猪瘟抗体阴性猪超过10%时，外因（如发病、疫苗质量、免疫程序等因素）导致猪瘟免疫失败的可能很高，建议查清楚阴性猪比例过高的原因。再次接种免疫，降低阴性猪比例后再进行“净化”，如果因“净化”需淘汰猪超过10%，那么“净化”的代价可能过高。
猪抗体检测篇三:猪蓝耳病与猪瘟混合感染的诊断报告（附：高清图及抗体检测数据）
1、材料与方法
1.1 对发病猪进行剖检
主要的病变发生在肺部，肺脏心叶发生对称性肉样变，肺脏水肿、充血、淤血，肺脏弥散性间质性肺炎的症状均有不同程度出现，喉头未见异常，怀疑存在支原体的继发感染（图1）。全身淋巴结肿大、出血（图2）。肾呈土黄色，表面凹凸不平（图3）。脾脏边缘发黑、梗死、不整（图4）。脑充血、胃底充血，其他脏器未见异常。
1.2 病料采集及猪场免疫情况
采取送检新鲜死亡的仔猪的扁桃体、肺脏、脑组织和淋巴结。该猪场进行过猪瘟免疫（21 d），猪伪狂犬病免疫（3 d，28d）。
1.3 酶和其他试剂
Taq DNA 聚合酶、dNTPs、DEPC水、DL2 000 Marker、总DNA 抽提试剂盒均购自上海生工生物有限公司，猪瘟RT-PCR 诊断试剂盒，猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR 诊断试剂盒、猪伪狂犬病PCR 诊断试剂盒购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司。猪瘟抗体检测试剂盒、猪蓝耳病检测试剂盒、猪伪狂犬病gB 抗体检测试剂盒购自美国IDEXX 生物试剂公司。
1.4 引物设计与合成
根据GenBank发表的PCV2 用Oligo6.0 软件设计引物。
1.5 病毒核酸检测
猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒、猪伪狂犬病病毒的扩增分别用猪瘟RT-PCR诊断试剂盒、猪蓝耳病RT-PCR 诊断试剂盒、猪伪狂犬病毒PCR 诊断试剂盒进行，PCR 产物经1.2％琼脂糖凝胶电泳鉴定。猪2 型圆环病毒扩增应用总DNA 抽提试剂盒提取模板，体外扩增反应条件95 ℃ 2 min ；（94 ℃ 30 s，50 ℃ 40 s，72 ℃ 40 min）×35 个循环，72 ℃延伸10 min，PCR 产物经1.2％琼脂糖凝胶电泳鉴定。
1.6 猪ELISA 抗体检测结果
将送检3 份血样离心分离血清，将稀释后的血清加入检测板，进行 ELISA实验，将检测板放入酶标仪内测各孔的OD 值。
2、试验结果
2.1 RT-PCR 扩增后结果
猪瘟检测结果进行RT-PCR 扩增后，PCR 产物用1.2％琼脂糖进行凝胶电泳后在凝胶成像系统中观察，可见到232 bp 左右的基因条带，大小与CSFV预期基因相符。
猪繁殖与呼吸综合征病毒检测结果进行RT-PCR 扩增后，PCR 产物用1.2％琼脂糖进行凝胶电泳后在凝胶成像系统中观察，可见到432 bp 左右的基因条带，大小与PRRSV 预期基因相符（见图5）。
2.2 猪伪狂犬病病毒、猪2 型圆环病毒
猪伪狂犬病病毒、猪2 型圆环病毒检测结果，将PCR 扩增产物用1.2％琼脂糖进行凝胶电泳，结果未见到目的基因。
2.3 抗体检测结果
将送检3 份血样离心分离血清，将稀释后的血清加入检测板，进行 ELISA实验，将检测板放入酶标仪内测各孔的OD 值，结果见表1。
3、结果分析及防控建议
3.1 猪瘟结果分析
该猪场哺乳仔猪猪瘟病原检测为强阳性，血清学检测结果显示，送检猪只猪瘟的抗体是合格的，说明哺乳仔猪发病主要是以窝为单位，发病的主要原因是母猪免疫不好或带毒造成的，建议对初生仔猪进行超免，对母猪群进行抗体检测，对不合格母猪进行猪瘟疫苗的补免，之后再进行检测，将抗体值是阴性的母猪淘汰。
3.2 猪蓝耳病结果分析
哺乳仔猪和保育猪蓝耳病抗原均为阳性，说明猪群正存在蓝耳病的暴发流行，是猪大批死亡的原因所在。从蓝耳病抗体检测结果分析，S/P 值在未免疫疫苗的情况下还是比较高的。建议措施：
1）对发病猪立即隔离。发病较重的仔猪进行淘汰，病死猪深埋。对猪舍和用具进行彻底消毒。
2）控制发病猪群的继发性细菌感染，即做好药物保健和预防，应用药物替米考星、支原净等对母猪进行净化。发病仔猪治疗以补充电解质和对症用药为主，控制继发感染。使用减毒活疫苗，对初生仔猪和母猪进行免疫。
3）进行疫苗免疫，建议使用弱毒苗，对空怀期母猪进行免疫，对新生仔猪7 d 免疫。
4、讨论
该场是我国北方中小型养猪场和散户的典型代表，这些猪场往往在管理上和疫病防控上存在诸多的漏洞，没有科学的管理和免疫程序，发生传染病往往没有科学的实验室诊断而延误病情，这些猪场诊断疾病主要是依靠基层有经验的兽医剖检进行诊断，但现在的疾病从眼观上病变都不是十分的明显、典型，而且混合感染、继发感染都比较严重，临床发病越来越严重，药物滥用而不见效果。有时猪场老板对兽医人员的疾病诊断产生质疑和不信任感，使得治疗执行力下降，延误最佳治疗时机。中小型养猪场和散户中猪病的流行和泛滥是以上诸多原因造成的。
该场仔猪的死亡主要是蓝耳病暴发的结果，就目前我国猪蓝耳病的发病情况来看，无论什么季节都会有猪蓝耳病发病的案例，但是发病最密集的季节为夏秋季，一般情况下猪蓝耳病发病时会呈现成片感染趋势，受感染猪群的发病率以及死亡率都非常高。对于蓝耳病的防控应做到掌握和了解本场感染和流行状况，主要应用血清学抗体检测技术。对于蓝耳病阴性猪场，不使用疫苗是最佳的手段，此外，应该做好生物安全措施，猪场进行闭群饲养，尽量避免引种，如确实需要引种，必须检测和检疫，绝对不能引入阳性猪。还需定期对猪场进行监测，保持蓝耳病阴性状态。对蓝耳病稳定而不活跃的猪场（母猪群阳性，但繁殖性能不受影响；生长猪群无感染），应做到以下几点：应尽量不用减毒活疫苗免疫，此外还应加强母猪的饲养管理，定期监测其感染状况；强化猪场的消毒与卫生，防止母猪排毒在猪场内传播；后备阴性母猪配种前与经产母猪混群饲养；监测生产猪群的血清学。对蓝耳病稳定而活跃的猪场（母猪群阳性，但繁殖性能不受影响；生长猪群有感染，临床发病，因继发感染有一定死亡率；病毒在猪场内传播），应强化猪场的消毒卫生，降低或杜绝病毒在猪场内传播；适当使用减毒活疫苗，依据实验室确诊的生长猪群的感染和发病阶段，提前3 ～ 4 周为生产猪群进行一次免疫，猪群稳定后应立即停止使用活疫苗；控制感染猪群的继发性细菌感染，即做好药物保健和预防。（资料来源：李树东 猪业科学,2015(9)P70-71）
